Ditiotreitol (DTT) je uobičajeno sredstvo za redukciju, poznato i kao novi zeleni aditiv.To je malo molekularno organsko jedinjenje s dvije merkaptanske grupe (-SH).Zbog svojih redukcijskih svojstava i stabilnosti, DTT se široko koristi u biohemijskim i molekularnim biološkim eksperimentima.
Glavna uloga DTT-a je da smanji disulfidne veze u proteinima i drugim biomolekulama.Disulfidna veza je važan dio savijanja i stabilnosti proteina, ali pod određenim eksperimentalnim uvjetima, kao što je reducibilna SDS-PAGE analiza, rekombinacija proteina i savijanje, potrebno je reducirati disulfidnu vezu na dvije tiolne grupe kako bi se otkrila prostorna struktura proteina. proteina.DTT može reagirati s disulfidnim vezama da ih reducira na merkaptanske grupe, otvarajući tako prostornu strukturu proteina i olakšavajući analizu i manipulaciju.
DTT se također može koristiti za zaštitu aktivnosti i stabilnosti enzima.U nekim reakcijama kataliziranim enzimima, aktivnost enzima može biti smanjena oksidansom.DTT može reagirati s oksidansima da ih reducira u bezopasne tvari, čime štiti aktivnost i stabilnost enzima.
U poređenju sa tradicionalnim redukcionim agensima kao što je β-merkaptoetanol (β-ME), DTT se smatra sigurnijim i stabilnijim redukcionim agensom.Ne samo da je stabilan u vodenom rastvoru, već i održava svoja redukciona svojstva pod visokim temperaturama i kiselo-baznim uslovima.
Upotreba DTT-a je relativno jednostavna.Općenito, DTT se rastvara u odgovarajućem puferu i zatim dodaje u eksperimentalni sistem.Optimalna koncentracija DTT-a se mora odrediti u skladu sa specifičnim eksperimentom i općenito se koristi u rasponu od 0,1-1 mM.Niže koncentracije mogu smanjiti štetne učinke na rast stanica i mogu smanjiti citotoksičnost zbog prekomjerne ekspresije ciljnih proteina.Veće koncentracije mogu uzrokovati prekomjerno metaboličko opterećenje ćelija, utičući na rast ćelija i efikasnost ekspresije.
Način da se odredi optimalna koncentracija može biti da se proceni nivo ekspresije ciljnog proteina provođenjem IPTG indukcionih testova pri različitim koncentracijama.Testovi kulture malih razmjera mogu se izvesti korištenjem raspona IPTG koncentracija (npr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, itd.), a učinak ekspresije pri različitim koncentracijama može se procijeniti otkrivanjem nivoa ekspresije ciljnog proteina (npr. Western blot ili detekcija fluorescencije).Prema eksperimentalnim rezultatima, kao optimalna koncentracija odabrana je koncentracija sa najboljim efektom ekspresije.
Osim toga, možete se obratiti i relevantnoj literaturi ili iskustvu drugih laboratorija kako biste razumjeli uobičajeni raspon koncentracija IPTG-a u sličnim eksperimentalnim uvjetima, a zatim optimizirali i prilagodili prema eksperimentalnim potrebama.
Važno je napomenuti da optimalna koncentracija može varirati ovisno o različitim ekspresionim sistemima, ciljnim proteinima i eksperimentalnim uvjetima, tako da je najbolje optimizirati od slučaja do slučaja.
Ukratko, DTT je uobičajeno korišćen redukcijski agens koji se može koristiti za smanjenje disulfidnih veza u proteinima i drugim biomolekulama i za zaštitu aktivnosti i stabilnosti enzima.Široko se koristi u biohemijskim i molekularnim biološkim eksperimentima.
Vrijeme objave: Sep-28-2023