Kako odrediti optimalnu koncentraciju?
Za induktor IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozid), što je veća koncentracija, to bolje.Optimalna koncentracija ovisi o specifičnim eksperimentalnim uvjetima i željenom indukcijskom efektu.
Generalno, koncentracija IPTG-a se koristi u rasponu od 0,1-1 mM.Niže koncentracije mogu smanjiti štetne učinke na rast stanica i mogu smanjiti citotoksičnost zbog prekomjerne ekspresije ciljnih proteina.Veće koncentracije mogu uzrokovati prekomjerno metaboličko opterećenje ćelija, utičući na rast ćelija i efikasnost ekspresije.
Način da se odredi optimalna koncentracija može biti da se proceni nivo ekspresije ciljnog proteina provođenjem IPTG indukcionih testova pri različitim koncentracijama.Testovi kulture malih razmjera mogu se izvesti korištenjem raspona IPTG koncentracija (npr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, itd.), a učinak ekspresije pri različitim koncentracijama može se procijeniti otkrivanjem nivoa ekspresije ciljnog proteina (npr. Western blot ili detekcija fluorescencije).Prema eksperimentalnim rezultatima, kao optimalna koncentracija odabrana je koncentracija sa najboljim efektom ekspresije.
Osim toga, možete se obratiti i relevantnoj literaturi ili iskustvu drugih laboratorija kako biste razumjeli uobičajeni raspon koncentracija IPTG-a u sličnim eksperimentalnim uvjetima, a zatim optimizirali i prilagodili prema eksperimentalnim potrebama.
Važno je napomenuti da optimalna koncentracija može varirati ovisno o različitim ekspresionim sistemima, ciljnim proteinima i eksperimentalnim uvjetima, tako da je najbolje optimizirati od slučaja do slučaja.
Vrijeme objave: Sep-28-2023