4-nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Efekat: ONPG je supstrat koji se posebno koristi za otkrivanje prisustva i aktivnosti enzima β-galaktozidaze.Kada je enzim β-galaktozidaza prisutan i aktivan, on cijepa ONPG na dva proizvoda: o-nitrofenol i derivat galaktoze.Oslobađanje o-nitrofenola rezultira promjenom žute boje, što se može izmjeriti spektrofotometrom.

Primjena: ONPG ima nekoliko primjena u istraživanju molekularne biologije i biokemije:

Određivanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se obično koristi za mjerenje i kvantifikaciju aktivnosti enzima β-galaktozidaze.Brzina stvaranja o-nitrofenola, koja je direktno proporcionalna aktivnosti enzima, može se izmjeriti spektrofotometrijski.

Ekspresija i regulacija gena: ONPG se često koristi u eksperimentima vezanim za ekspresiju gena i studije regulacije.Često se koristi u testovima fuzionih proteina, kao što je uobičajeno korišćeni lacZ fuzioni sistem, za proučavanje ekspresije gena pod kontrolom specifičnih promotora.Aktivnost beta-galaktozidaze mjerena pomoću ONPG-a pruža uvid u nivo ekspresije gena.

Skrining za aktivnost β-galaktozidaze: ONPG se može koristiti kao kolorimetrijska metoda skrininga u tehnologiji rekombinantne DNK za identifikaciju prisutnosti i funkcionalnosti LacZ gena, koji kodira β-galaktozidazu.Ova metoda skrininga pomaže u identifikaciji klonova koji sadrže gen od interesa.

Studije kinetike enzima: ONPG je takođe koristan u proučavanju kinetike enzima β-galaktozidaze.Mjerenjem brzine reakcije enzim-supstrat pri različitim koncentracijama supstrata moguće je odrediti kinetičke parametre kao što su Michaelis-Menten konstante (Km) i maksimalne brzine reakcije (Vmax).